Dès 4 ans, Alyson Hannigan montre sa frimousse rouquine à la caméra. D'abord dans des pubs puis au cinéma où elle apparaît déjà à 14 ans aux côtés de
Dan Aykroyd et
Kim Basinger dans la comédie
J'ai épousé une extraterrestre. En 1994, elle obtient un des rôles titre de la série
Free Spirit qui s'arrête après 14 épisodes puis fait plusieurs participations à des téléfilms et séries comme
High Secret City : la ville du grand secret. 1997 marque définitivement sa carrière puisque Alyson est choisie pour jouer Willow dans
Buffy contre les vampires. Son rôle de la très sage meilleure amie de Buffy évolue au fil des saisons jusqu'à certaines ambiguïtés sur son identité sexuelle et l'actrice assume son personnage et les tendances bisexuelles de l'adolescente qu'elle interprète. Willow devient alors l'un des personnages préférés des fans qui retrouve Alyson dans des films pour teenagers
: American Pie (et ses suites) et
Boys and Girls. En 2003, alors que la série s'arrête, Alyson se marie avec Alexis Denisof, interprète de Wesley Wyndam-Pryce dans
Buffy contre les vampires et son spin-off
Angel, devient Trina le temps de 3 épisodes dans
Veronica Mars et retrouve une place de choix dans la série
How I met your mother où elle offre tous ses talents comiques à l'institutrice romantique Lily.